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尼罗罗非鱼IgM单抗的制备及IgM+B淋巴细胞吞噬能力的研究

吴丽婷 孔令贺 王君如 杨延舰 尹晓雪 叶剑敏

吴丽婷, 孔令贺, 王君如, 杨延舰, 尹晓雪, 叶剑敏. 尼罗罗非鱼IgM单抗的制备及IgM+B淋巴细胞吞噬能力的研究[J]. 华南师范大学学报(自然科学版), 2018, 50(5): 60-68. doi: 10.6054/j.jscnun.2018100
引用本文: 吴丽婷, 孔令贺, 王君如, 杨延舰, 尹晓雪, 叶剑敏. 尼罗罗非鱼IgM单抗的制备及IgM+B淋巴细胞吞噬能力的研究[J]. 华南师范大学学报(自然科学版), 2018, 50(5): 60-68. doi: 10.6054/j.jscnun.2018100
WU Liting, KONG Linghe, WANG Junru, YANG Yanjian, YIN Xiaoxue, YE Jianmin. The Preparation of McAb Against IgM from Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) and the Analysis of the Phagocytosis of Fluorescence Microspheres by mIgM+B Lymphocytes[J]. Journal of South China normal University (Natural Science Edition), 2018, 50(5): 60-68. doi: 10.6054/j.jscnun.2018100
Citation: WU Liting, KONG Linghe, WANG Junru, YANG Yanjian, YIN Xiaoxue, YE Jianmin. The Preparation of McAb Against IgM from Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) and the Analysis of the Phagocytosis of Fluorescence Microspheres by mIgM+B Lymphocytes[J]. Journal of South China normal University (Natural Science Edition), 2018, 50(5): 60-68. doi: 10.6054/j.jscnun.2018100

尼罗罗非鱼IgM单抗的制备及IgM+B淋巴细胞吞噬能力的研究

doi: 10.6054/j.jscnun.2018100
基金项目: 

国家自然科学基金项目(31172432,31472302);华南师范大学研究生创新计划项目(2017LKXM010)

详细信息
    通讯作者:

    叶剑敏,教授,国家“千人计划”青年人才项目入选者,Email: yjmying@126.com.

  • 中图分类号: Q813.2

The Preparation of McAb Against IgM from Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) and the Analysis of the Phagocytosis of Fluorescence Microspheres by mIgM+B Lymphocytes

Funds: 

国家自然科学基金项目(31172432,31472302);华南师范大学研究生创新计划项目(2017LKXM010)

  • 摘要: 采用免疫亲和层析方法纯化尼罗罗非鱼抗TNP特异性IgM,并以此为抗原免疫Babl/c小鼠进行单克隆抗体制备. 免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合成杂交瘤细胞,利用酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法(Western blot)和流式细胞术筛选获得两株抗IgM重链的单克隆抗体,分别命名为3B3和9D12. 纯化后的单克隆抗体3B3和9D12在1 mg/mL浓度下其抗体效价分别为740,741和359,712 units/mL. 利用制备的单抗结合激光共聚焦显微镜检测发现,膜结合型IgM位于B细胞膜表面(IgM+ B细胞). 流式细胞术检测尼罗罗非鱼IgM+ B细胞的免疫组织分布,发现IgM+ B细胞分布存在组织差异性,其中在外周血(PBL)所占比例最大,约为37.6%,其次是脾脏(SPL),占百分比33.7%,头肾(AK)占比例约为23.9%,而后肾(PK)占比例约为20%. IgM+ B细胞荧光微球的吞噬能力分析发现,IgM+ B细胞对0.5 m的荧光微球吞噬能力强于1 m. 另外,IgM+ B细胞的吞噬能力存在免疫组织差异性,其中对于0.5 m荧光微球的吞噬,PBL明显高于其他组织,而AK IgM+ B细胞对1 m荧光微球的吞噬能力最强. 以上结果表明,本研究成功制备了鼠抗尼罗罗非鱼IgM单抗工具,并利用其IgM单抗发现IgM+ B细胞具有吞噬能力且其吞噬能力存在组织差异性,表明IgM+ B细胞在先天性免疫中可能发挥重要作用.
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出版历程
  • 收稿日期:  2018-09-30
  • 刊出日期:  2018-10-25

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