The Preparation of McAb Against IgM from Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) and the Analysis of the Phagocytosis of Fluorescence Microspheres by mIgM+B Lymphocytes
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摘要: 采用免疫亲和层析方法纯化尼罗罗非鱼抗TNP特异性IgM,并以此为抗原免疫Babl/c小鼠进行单克隆抗体制备. 免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合成杂交瘤细胞,利用酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法(Western blot)和流式细胞术筛选获得两株抗IgM重链的单克隆抗体,分别命名为3B3和9D12. 纯化后的单克隆抗体3B3和9D12在1 mg/mL浓度下其抗体效价分别为740,741和359,712 units/mL. 利用制备的单抗结合激光共聚焦显微镜检测发现,膜结合型IgM位于B细胞膜表面(IgM+ B细胞). 流式细胞术检测尼罗罗非鱼IgM+ B细胞的免疫组织分布,发现IgM+ B细胞分布存在组织差异性,其中在外周血(PBL)所占比例最大,约为37.6%,其次是脾脏(SPL),占百分比33.7%,头肾(AK)占比例约为23.9%,而后肾(PK)占比例约为20%. IgM+ B细胞荧光微球的吞噬能力分析发现,IgM+ B细胞对0.5 m的荧光微球吞噬能力强于1 m. 另外,IgM+ B细胞的吞噬能力存在免疫组织差异性,其中对于0.5 m荧光微球的吞噬,PBL明显高于其他组织,而AK IgM+ B细胞对1 m荧光微球的吞噬能力最强. 以上结果表明,本研究成功制备了鼠抗尼罗罗非鱼IgM单抗工具,并利用其IgM单抗发现IgM+ B细胞具有吞噬能力且其吞噬能力存在组织差异性,表明IgM+ B细胞在先天性免疫中可能发挥重要作用.Abstract: In this study, the TNP-specific IgM was purified from Nile tilapia (Oreochromis niloticus) by affinity chromatography and immunized the Babl/c mice for monoclonal antibody (McAb) preparation. The splenocytes from immunized mice were fused with myeloma cells (SP2/0) by hybridoma technique. The positive cells, secreting anti-tilapia IgM antibodies, were screened by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blotting and flow cytometry. Two hybridomas were identified, named 3B3 and 9D12, and both monoclonal antibodies were prepared. The titers of purified McAb, 3B3 and 9D12 at the concentration of 1 mg/mL, were 740,741 and 359,712 units/mL, respectively. Utilizing the McAb, confocal laser microscopy detection showed that membrane IgM (mIgM) was located on the surface of B cell membrane. Distribution analysis of mIgM+ cell in immune tissues by flow cytometry revealed its tissue-dependent, with the maximum in peripheral blood (PBL) about 37.6%, followed by the spleen (SPL) 33.7%, the anterior kidney (AK) for about 23.9%, and the posterior kidney about 20%. The phagocytosis of mIgM+ B cells uptaking fluorescent microspheres showed that the phagocytic ability of mIgM+ B cells was higher on 0.5 m beads than for 1 m beads. The phagocytosis of mIgM+ B cells varied from immune tissues, with the uptaking 0.5 m beads highest in PBL but AK occupying the maximum for 1 m beads. Taken together, the anti-Nile tilapia IgM McAb was successfully prepared, and the mIgM+ B cells had the tissue-dependent phagocytic activity, indicating that mIgM+ B cells might play an important role in innate immune response.
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Keywords:
- Nile tilapia /
- IgM /
- monoclonal antibody /
- IgM+B cells /
- phagocytosis
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设1p+1q=1(p>1),α, β ∈R,K(x, y)非负可测,若Lαp(0,+∞)={f(x)⩾0:‖f‖p,α=(∫+∞0xαfp(x)dx)1/p<+∞}, 则称不等式
∫+∞0∫+∞0K(x,y)f(x)g(y)dxdy⩽M‖f‖p,α‖g‖q,β 为Hilbert型积分不等式. 由于此类不等式与积分算子T:
T(f)(y)=∫+∞0K(x,y)f(x)dx 有密切的联系,故而Hilbert型积分不等式对于研究算子T的有界性与算子范数有重要意义.
1991年,XU和GAO[1]首次提出了研究Hilbert型不等式的权系数方法. 该方法的核心是:引入2个搭配参数a、b,利用Hölder不等式,可得到如下形式的不等式:
∫+∞0∫+∞0K(x,y)f(x)g(y)dxdy⩽W1/p1(b,p)W1/q2(a,q)(∫+∞0xα(a,b)fp(x)dx)1/p×(∫+∞0yβ(a,b)gq(y)dx)1/q. (1) 一般地,随意选取的搭配参数a、b并不能使式(1)的常数因子W11/p(b, p)W21/q(a, q)最佳. 已有的相关研究[2-13]基本上都是凭借丰富的经验和娴熟的分析技巧选取适当的搭配参数a、b,从而获得最佳的Hilbert型不等式.
若选取的搭配参数a、b能够使式(1)的常数因子最佳,则称其为适配参数或适配数. 文献[14]曾讨论了齐次核的Hilbert型级数不等式的适配参数问题,本文将对拟齐次核的Hilbert型积分不等式讨论搭配参数a、b成为适配数的充分必要条件,并讨论其应用.
1. 预备知识
设G(u, v)是λ阶齐次函数,λ1λ2>0,则称K(x, y)=G(xλ1, yλ2)为拟齐次函数. 显然K(x, y)为拟齐次函数等价于:对t>0,有
K(tx,y)=tλ1λK(x,t−λ1/λ2y),K(x,ty)=tλ2λK(t−λ2/λ1x,y). 下面给出本文证明过程中所需的引理.
引理1 设1/p+1/q=1 (p>1),a, b, λ∈R,λ1λ2>0,G(u, v)是λ阶齐次非负函数,K(x, y)=G(xλ1, yλ2),aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ,记
W1(b,p)=∫+∞0K(1,t)t−bp dt,W2(a,q)=∫+∞0K(t,1)t−aq dt, 则W1(b, p)/λ1=W2(a, q)/λ2,且
ω1(b,p,x)=∫+∞0K(x,y)y−bp dy=xλ1(λ−bp/λ2+1/λ2)W1(b,p),ω2(a,q,y)=∫+∞0K(x,y)x−aq dx=yλ2(λ−aq/λ1+1/λ1)W2(a,q). 证明 由aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ,可得- λ1λ + λ1bp/λ2-λ1/λ2-1=-aq. 则有
W1(b,p)=∫+∞0tλ2λK(t−λ2/λ1,1)t−bp dt= λ1λ2∫+∞0K(u,1)u−λ1λ+λ1bp/λ2−λ1/λ2−1 du= λ1λ2∫+∞0K(u,1)u−aq du=λ1λ2W2(a,q), 故W1(b, p)/λ1=W2(a, q)/λ2.
作变换y=xλ1/λ2t,有
ω1(b,p,x)=∫+∞0xλ1λK(1,x−λ1/λ2y)y−bp dy= xλ1(λ−bp/λ2+1/λ2)∫+∞0K(1,t)t−bp dt= xλ1(λ−bp/λ2+1/λ2)W1(b,p). 同理可证ω2(a, q, y)=yλ2(λ-aq/λ1+1/λ1)W2(a, q). 证毕.
2. 适配参数的充分必要条件
定理1 设1/p+1/q=1 (p>1),a, b, λ∈R,λ1λ2>0,G(u, v)是λ阶齐次非负可测函数,K(x, y)=G(xλ1, yλ2),W1(b, p)与W2(a, q)如引理1所定义. 那么
(1) 若α=λ1[λ+1λ2+p(aλ1−bλ2)],β=λ2[λ+1λ1+p(bλ2−aλ1)], 则有
∫+∞0∫+∞0K(x,y)f(x)g(y)dxdy⩽W1/p1(b,p)W1/q2(a,q)‖f‖p,α‖g‖q,β, (2) 其中, f(x)∈Lαp(0,+∞),g(y)∈Lβq(0,+∞).
(2) 式(2)中的常数因子W11/p(b, p)W21/q(a, q)是最佳的,当且仅当aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ,W1(b, p)和W2(a, q)都收敛. 当aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ时,式(2)化为
∫+∞0∫+∞0K(x,y)f(x)g(y)dxdy⩽ W0|λ1|1/q|λ2|1/p‖f‖p,apq−1‖g‖q,bpq−1, (3) 其中, W0=|λ1|W2(a, q)= |λ2|W1(b, p).
证明 (i)选择a、b为搭配参数. 根据Hölder不等式和引理1,利用权系数方法,有
∫+∞0∫+∞0K(x,y)f(x)g(y)dxdy=∫+∞0∫+∞0(xaybf(x))(ybxag(y))K(x,y)dxdy⩽(∫+∞0∫+∞0xapybpfp(x)K(x,y)dxdy)1/p×(∫+∞0∫+∞0ybqxaqgq(y)K(x,y)dxdy)1/q=(∫+∞0xapfp(x)ω1(b,p,x)dx)1/p×(∫+∞0ybqgq(y)ω2(a,q,y)dy)1/q=W1/p1(b,p)W1/q2(a,q)×(∫+∞0xap+λ1(λ−bp/λ2+1/λ2)fp(x)dx)1/p×(∫+∞0ybq+λ2(λ−aq/λ1+1/λ1)gq(y)dx)1/q=W1/p1(b,p)W1/q2(a,q)‖f‖p,α‖g‖q,β, 故式(2)成立.
(ii) 充分性:设aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ,W1(b, p)和W2(a, q)收敛. 由引理1,有W1(b, p)/λ1=W2(a, q)/λ2,故
W1/p1(b,p)W1/q2(a,q)=(λ2λ1)1/qW1(b,p)=W0|λ1|1/q|λ2|1/p, 且α=apq-1,β=bpq-1,于是式(2)可化为式(3).
设式(3)的最佳常数因子为M0,则M0≤W0/(|λ11/q|λ2|1/p),且用M0取代式(3)中的常数因子后,式(3)仍然成立.
取充分小的ε>0及δ>0,令
f(x)={x(−apq−|λ1|ε)/p(x⩾1),0(0<x<1);g(y)={y(−bpq−|λ2|ε)/q(y⩾δ),0(0<y<δ). 则
‖f‖p,apq−1‖g‖q,bpq−1=(∫+∞1x−1−|λ1|εdx)1/p(∫+∞δy−1−|λ2|εdy)1/q=(1|λ1ε|)1/p(1|λ2|εδ−|λ2|ε)1/q=1ε|λ1|1/p|λ2|1/qδ−|λ2|ε/q,∫+∞0∫+∞0K(x,y)f(x)g(y)dxdy=∫+∞1x−aq−|λ1|ε/p(∫+∞δy−bp−|λ2|ε/qK(x,y)dy)dx=∫+∞1x−aq−|λ1|ε/p+λλ1(∫+∞δy−bp−|λ2|ε/qK(1,x−λ1/λ2y)dy)dx=∫+∞1x−1−|λ1|ε(∫+∞x−λ1/λ2δt−bp−|λ2|ε/qK(1,t)dt)dx⩾∫+∞1x−1−|λ1|ε(∫+∞δt−bp−|λ2|ε/qK(1,t)dt)dx=1|λ1|ε∫+∞δt−bp−|λ2|ε/qK(1,t)dt. 于是
1|λ1|∫+∞δt−bp−|λ2|ε/qK(1,t)dt⩽M0|λ1|1/p|λ2|1/qδ−|λ2|ε/q. 先令ε→0+,再令δ→0+,得
W1(b,p)=∫+∞0t−bpK(1,t)dt⩽M0|λ1|1/p|λ2|1/q. 再根据引理1,可得到W0/(|λ1|1/q|λ2|1/p)≤M0. 所以式(3)的最佳常数因子M0=W0/(|λ1|1/q|λ2|1/p).
必要性:设式(2)的常数因子W11/p(b, p)W21/q(a, q)是最佳的,则W1(b, p)和W2(a, q)是收敛的. 下证aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ.
记1λ1aq+1λ2bp−(1λ1+1λ2+λ)=c,a1=a−λ1cpq,b1=b−λ2cpq,则
α=λ1[λ+1λ2+p(a1λ1−b1λ2)]=α1,β=λ2[λ+1λ1+p(b1λ2−a1λ1)]=β1,W2(a,q)=∫+∞0K(t,1)t−aq dt=λ2λ1∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2c dt. 于是可知式(2)等价于
∫+∞0∫+∞0K(x,y)f(x)g(y)dxdy⩽W1/p1(b,p)(λ2λ1∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2c dt)1/q‖f‖p,α1‖g‖q,β1. 又经计算有a1q/λ1+b1p/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ,α1=a1pq-1,β1=b1pq-1,故式(2)进一步等价于
∫+∞0∫+∞0K(x,y)f(x)g(y)dxdy⩽W1/p1(b,p)(λ2λ1∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2c dt)1/q×‖f‖p,a1pq−1‖g‖q,b1pq−1. (4) 根据假设,式(4)的最佳常数因子是W11/p(b, p)×(λ2λ1∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2cdt)1/q. 又由1λ1a1q+1λ2b1p=1λ1+1λ2+λ及充分性的证明,可知式(4)的最佳常数因子为
1|λ1|1/q|λ2|1/p(|λ2|∫+∞0K(1,t)t−b1p dt)=(λ2λ1)1/q∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2c/q dt 于是得到
∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2c/q dt=W1/p1(b,p)(∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2c dt)1/q. (5) 对于1和tλ2c/q,应用Hölder不等式,有
∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2c/q dt=∫+∞0tλ2c/qK(1,t)t−bp dt⩽(∫+∞01pK(1,t)t−bp dt)1/p(∫+∞0tλ2cK(1,t)t−bp dt)1/q=W1/p1(b,p)(∫+∞0K(1,t)t−bp+λ2c dt)1/q. (6) 根据式(5),可知式(6)取等号. 又根据Hölder不等式取等号的条件,可得tλ2c/q=常数,故c=0,即aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ1. 证毕.
注1 定理1表明: 当且仅当aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ时,搭配参数a、b是适配参数. 因此,只要选取a、b满足aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ,就可以得到各种各样的具有最佳常数因子的Hilbert型积分不等式.
推论1 设1/p+1/q=1 (p>1),λ1λ2>0,λ >0,1/r+1/s=1 (r>1),α=p(1- λλ1/r)-1,β=q(1- λλ2/s)-1,则
∫+∞0∫+∞0f(x)g(y)(xλ1+yλ2)λdxdy⩽1|λ1|1/q|λ2|1/p B(λr,λs)‖f‖p,α‖g‖q,β, (7) 其中的常数因子是最佳的,f(x)∈Lpα(0, +∞),g(y)∈Lqβ(0, +∞).
证明 记K(x, y)=G(xλ1, yλ2)=1/(xλ1+yλ2)λ,则G(u, v)是-λ阶齐次非负函数. 选取搭配参数a=1q(1−λλ1r),b=1p(1−λλ2s), 可得
1λ1aq+1λ2bp=1λ1(1−λλ1r)+1λ2(1−λλ2s)=1λ1+1λ2−λ, 故a、b是适配参数. 又因为apq-1=p(1- λλ1/r)-1=α,bpq-1=q(1- λλ2/s)-1=β,且
W0=|λ2|W1(b,p)=|λ2|∫+∞01(1+tλ2)λtλλ2/s−1 dt=∫+∞01(1+u)λuλ/s−1 du=B(λs,λ−λs)=B(λr,λs). 根据定理1,式(7)成立,且其常数因子是最佳的. 证毕.
3. 在求积分算子范数中的应用
根据Hilbert型不等式与相应积分算子的关系理论,由定理1可得如下定理.
定理2 设1/p+1/q=1 (p>1),a, b, λ ∈ R,λ1λ2>0,α=apq-1,β=bpq-1,G(u, v)是λ阶齐次非负可测函数,K(x, y)=G(xλ1, yλ2),且
W1(b,p)=∫+∞0K(1,t)t−bp dt<+∞,W2(a,q)=∫+∞0K(t,1)t−aq dt<+∞, 则当aq/λ1+bp/λ2=1/λ1+1/λ2+ λ时,积分算子T:
T(f)(y)=∫+∞0K(x,y)f(x)dx,f(x)∈Lαp(0,+∞) 是从Lpα(0, +∞)到Lpβ(1-p)(0, +∞)的有界算子,且T的算子范数为
‖T‖=|λ2|W1(b,p)|λ1|1/q|λ2|1/p=(λ2λ1)1/q∫+∞0K(1,t)t−bp dt. 推论2 设1/p+1/q=1 (p>1),λ1λ2>0,-1 < λ < min{1±4/λ1, 1±4/λ2},α=p[1+ λ1(λ -1)/2]-1,β=p[1+ λ2(λ -1)/2]-1,则积分算子T:
T(f)(y)=∫+∞0|xλ1−yλ2|λmax{xλ1,yλ2}f(x)dx,f(x)∈Lαp(0,+∞) 是从Lpα(0, +∞)到Lpβ(1-p)(0, +∞)的有界算子,且T的算子范数为
‖T‖=1|λ1|1/q|λ2|1/p[ B(λ+1,1−λ2−2λ2)+ B(λ+1,1−λ2+2λ2)]. 证明 记K(x, y)=G(xλ1, yλ2)= |xλ1-yλ2|λ/max{xλ1, yλ2},则G(u, v)是λ -1阶齐次函数. 取a= 1q[1+λ12(λ−1)],b=1p[1+λ22(λ−1)],则
1λ1aq+1λ2bp=1λ1[1+λ12(λ−1)]+1λ2[1+λ22(λ−1)]= 1λ1+1λ2+λ−1, 故a、b是适配参数. 又apq−1=p[1+λ12(λ−1)]−1=α,bpq−1=q[1+λ22(λ−1)]−1=β. 则
(λ2λ1)1/q∫+∞0K(1,t)t−bp dt=(λ2λ1)1/q∫+∞0|1−tλ2|λmax{1,tλ2}t−[1+λ2(λ−1)/2]dt=1|λ1|1/q|λ2|1/p[ B(λ+1,1−λ2−2λ2)+B(λ+1,1−λ2+2λ2)]<+∞. 根据定理2,知推论2成立. 证毕.
推论3 设1/p+1/q=1 (p>1),1/r+1/s=1 (r>1),λ1λ2>0,α=p(1- λ1/r)-1,β=q(1- λ2/s)-1. 则积分算子T:
T(f)(y)=∫+∞0ln(xλ1/yλ2)xλ1−yλ2f(x)dx,f(x)∈Lαp(0,+∞) 是从Lpα(0, +∞)到Lpβ(1-p)(0, +∞)的有界算子,且T的算子范数为
‖T‖=1|λ1|1/q|λ2|1/p[ζ(2,1r)+ζ(2,1s)], 其中ζ(t, a)是Riemann函数.
证明 记
K(x,y)=G(xλ1,yλ2)=ln(xλ1/yλ2)xλ1−yλ2, 则G(u, v)是-1阶齐次非负函数.
取搭配参数a=1q(1−λ1r),b=1p(1−λ2s),则
1λ1aq+1λ2bp=1λ1(1−λ1r)+1λ2(1−λ2s)=1λ1+1λ2−1, 故a、b是适配参数. 又apq-1=p(1- λ1/r)-1=α,bpq-1=q(1- λ2/s)-1=β,且
(λ2λ1)1/q∫+∞0K(1,t)t−bp dt=(λ2λ1)1/q∫+∞0ln(t−λ2)1−tλ2tλ2/s−1 dt=1|λ1|1/q|λ2|1/p[ζ(2,1r)+ζ(2,1s)]<+∞ 根据定理2,知推论3成立. 证毕.
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1. 肖世伟,李承凯,杨美娜,冯祥虎,孙国萃,杜军. MIPS指令集的流水线CPU模型机设计. 单片机与嵌入式系统应用. 2023(02): 15-18 . 百度学术
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